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腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達(dá)的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提...

簡析各類細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。定義隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。下文中將從多個維度，介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的各類小知識。一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達(dá)的蛋?正確折疊并進(jìn)行復(fù)雜修飾，表達(dá)的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，進(jìn)行蛋白功能研究。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細(xì)胞，表達(dá)?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系），如圖...

這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對于冷凍時間長、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動物細(xì)...

科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎？帶您認(rèn)識幾款優(yōu)秀的核酸染料一、李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。據(jù)不*統(tǒng)計，有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢占據(jù)核酸染料使用量多，在眾多的EB替代染料中，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名，要么是國內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無保障。Life公司的SYBRGreen,SYBRGoad,SYBR...

一、細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?，細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測所用的方法相近，但實驗?zāi)康牟煌＜?xì)胞增殖是通過細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化，例如細(xì)胞計數(shù)法，反應(yīng)的就是細(xì)胞真實的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測，則是通過檢測細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化，進(jìn)而判斷藥物或處理措施的作用，細(xì)胞活性檢測所得結(jié)論，往往反映了實驗設(shè)計的目的。細(xì)胞增殖檢測，因檢測標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類：DNA合成檢測、代謝活性檢測、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測和ATP濃度...

生物大分子的貯藏保存可分為干態(tài)和液態(tài)貯藏兩種。蛋白質(zhì)失活受多種理化因素的影響，主要有空氣、溫度、水分、光線、酸堿度、樣品狀態(tài)、微生物活動、保存時間和容器等。這些因素可單獨起作用，但更多情況是協(xié)同作用?？偟膩碚f，蛋白質(zhì)的保存主要考慮其構(gòu)型穩(wěn)定、活性中心的保護(hù)、避免輔助因子喪失等，以防止其變性、解聚或降解。由于溫度和水分對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性影響很大，故蛋白質(zhì)最好是低溫、冷凍或冷凍干燥后低溫干燥保存。1.液態(tài)保存(1).在低溫下保存蛋白質(zhì)對熱敏感，溫度越高，穩(wěn)定性越差。因此，低溫保存蛋...