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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫...

溶酶體（Lysosomes）是動(dòng)物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器,其存在的完整性與動(dòng)物生理病理均密切相關(guān)。溶酶體是真核細(xì)胞中為單層膜所包圍的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細(xì)胞內(nèi)的消化功能。新形成的初級(jí)溶酶體經(jīng)過(guò)與多種其他結(jié)構(gòu)反復(fù)融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對(duì)包裹在其中的分子進(jìn)行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細(xì)胞內(nèi)的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，...

這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...

轉(zhuǎn)染是一種將外來(lái)顆粒和核酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的技術(shù)，它可以通過(guò)化學(xué)的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)。轉(zhuǎn)染試劑用于提高基因?qū)嶒?yàn)的效率，從而可以在應(yīng)用基因和基因組令人難以置信的功能領(lǐng)域進(jìn)行大量研究。在所有轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染方式的選擇尤為重要。陽(yáng)離子聚合物與帶負(fù)電荷的核酸序列結(jié)合，帶正電荷的復(fù)合物被細(xì)胞膜吸引并通過(guò)內(nèi)吞作用整合到宿主細(xì)胞中。此類試劑包括PLGA（聚乳酸-乙醇酸共聚物），一種可安全用于轉(zhuǎn)染程序的食品級(jí)聚合物，以及PBAE（聚-β-氨基酯），一種能夠保護(hù)DNA分子的聚合物在宿主細(xì)胞內(nèi)遞送。這些從P...

微生物培養(yǎng)所培養(yǎng)的微生物通常是病菌、細(xì)菌、放線菌、真菌等，屬于生物培養(yǎng)的一種。微生物培養(yǎng)步驟：1.配置不同濃度的營(yíng)養(yǎng)液稀釋液:取營(yíng)養(yǎng)液1ml溶于9ml無(wú)菌水中,振蕩5min配成10%的溶液.2.將容器口靠近(注意不是對(duì)著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無(wú)菌水的試管中.以此類推制成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.3.將試管口靠近(注意不是對(duì)著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養(yǎng)皿中,在各培養(yǎng)皿上標(biāo)...

蛋白酶K來(lái)源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber），是一種與枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶。由于它能降解角蛋白（keratin），因此被命名為蛋白酶K。它是一種高活性的廣譜蛋白酶，在變性劑尿素或十二烷基磺酸鈉（sodiumdodecylsulfonate，SDS）溶液中依然能保持較高酶活力，所以被廣泛應(yīng)用于各種生物材料中的DNA或RNA的提取。蛋白酶K的性質(zhì)從這三個(gè)方面介紹：一、分子結(jié)構(gòu)蛋白酶K由一條肽鏈組成，包含277個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)...